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关于ELISA实验时移液器正确的使用方法
发布时间：2026-01-16 17:59:33
核心操作原则（适用于所有步骤）
在开始前，请牢记以下通用原则，这些是良好操作的基础：
垂直持握：吸液和排液时，保持移液器垂直，枪头尖端浸入液面以下2-3毫米。角度过大会导致吸入体积不准。
平稳操作：所有动作（按压活塞、吸液、排液）都应平稳、匀速，避免突然松手或猛力按压。
预润洗：在吸取粘稠、易挥发或密度与水不同的液体（如血清、样品稀释液）时，应采用预润洗：先吸放液体2-3次，使枪头内壁吸附平衡，再正式吸取，以确保体积准确。
一吸一换：绝对禁止同一个枪头连续吸取不同试剂或样品，必须每次更换新枪头，这是避免交叉污染的铁律。
先混匀，后吸取：所有试剂和样品在加样前，都应轻轻涡旋或上下颠倒混匀（避免产生气泡）。
关键步骤操作详解
下表以ELISA中加样、加酶、加终止液等关键步骤为例，说明具体操作要点：
实验步骤 | 操作要点与常见错误 | 正确操作图示/描述 |
1. 加样品/标准品 | 要点：体积小（通常50-100μL），要求精度最高。 | 枪头尖端轻触孔壁内侧面（非液面），缓慢匀速推出液体。确保液滴全部排出，枪头尖端在孔壁轻靠一下再移开。 |
2. 加酶结合物 | 要点：通常含有蛋白质，易产生气泡。 | 枪头尖端靠近液面或孔壁，缓慢推出液体。加完后可轻轻拍打板子侧面帮助混匀，避免剧烈震荡。 |
3. 加终止液 | 要点：液体具有强酸性和腐蚀性，且反应剧烈。 | 务必在计时到点后立即、快速但均匀地加入所有孔。建议使用多通道移液器或排枪，确保所有孔在几秒内完成加样。 |
ELISA移液器使用注意事项清单
移液器选择与校准：根据体积选择合适量程的移液器（最佳使用范围是量程的35%-100%）。定期（每年）进行校准。
枪头匹配：使用原厂或高品质、匹配的枪头，确保气密性。
温度平衡：确保试剂、样品和移液器在室温（18-25℃）平衡后再操作，尤其是从冰箱取出的试剂。
“二档”吸液法：
1、第一档：将活塞按压至第一停点。
2、将枪头垂直浸入液面下2-3mm，缓慢平稳地松开活塞，吸液。
3、移出液面，必要时用无屑纸巾轻拭枪头外壁。
3、将枪头尖端以约45度角轻触容器内壁，先平稳按至第一停点排出液体，稍作停顿（1秒），再按至第二停点（吹出档），将剩余液体完全吹出。
避免气泡：吸液和排液时动作要慢，避免产生气泡。加样后若孔内有气泡，可用干净的枪头轻轻戳破。
总结：一张图回顾核心流程
对于关键加样步骤，你可以遵循以下流程以确保精确性：
最后，ELISA是“细节决定成败”的实验。 熟练掌握移液器只是第一步，整个实验过程中的孵育时间、温度控制、洗板彻底程度等都会影响结果。如果某个步骤（如洗板）操作不稳定，即使加样再精准，最终数据也可能不理想。
